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PolyLC PolyPROPYLA色谱柱

PolyLC PolyPROPYLA色谱柱是硅胶基材料,可通过疏水相互作用(HIC),HIC分离蛋白的方法是基于蛋白质的疏水特点,比如RPC。但是,HIC使用完-全含水的缓冲器,保留住了蛋白质的三级结构和生物活性。这种分离性通常优于RPC方法分离蛋白质和多肽,能够极大的保留蛋白质的二级结构和三级结构。

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  • 更新时间:2025-07-22
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PolyPROPYLA色谱柱是硅胶基材料,可通过疏水相互作用(HIC),HIC分离蛋白的方法是基于蛋白质的疏水特点,比如RPC。但是,HIC使用完-全含水的缓冲器,保留住了蛋白质的三级结构和生物活性。这种分离性通常优于RPC方法分离蛋白质和多肽,能够极大的保留蛋白质的二级结构和三级结构。通常情况下,样品使用硫酸盐或磷酸盐等盐浓度降低梯度洗脱,通过增加蛋白质表面疏水性将其洗脱。表面活性剂(例如丙磺酸;辛基糖苷)如果必要的话可以被添加到流动相的。PolyPROPYLA的相对疏水值为100。HIC比其他方法有更大的敏感性,尤其是涉及到非极性基团。HIC适用于:

  • 多维蛋白纯化(建议顺序:离子交换-盐梯度洗涤分离-HIC)。

  • 多肽的纯化(比如毒液、糖肽类)

  • 表面抗体

  • 质量控制分析蛋白质的单一残基的极性或者突变体的修饰位点。

大于20KDa的蛋白质建议使用1000 -或1500-A的孔。其能力可以与离子交换相媲美。除非该蛋白是公-认的显著疏水性,建议使用PolyPROPYL A。

HIC 的问题:

  1. 脱盐:不幸的是,HIC 中使用的盐不可冻干。它们可以使用色谱法(空间排阻、反相等)或透析从样品中去除。

  2. 基线:HIC 中使用的显着盐浓度梯度导致流动相的折射率发生巨大变化。这可能会导致基线出现人为峰。例如,当在 220 nm 处监测流出物时,使用硫酸铵梯度会产生一个上升的基线,并具有较宽的*大值。根据使用的盐和波长,可能会观察到基线上升或下降。该问题在 254nm 和 280nm 处不太严重。基线的变化对可以在线可靠检测的蛋白质量施加了一个下限。如果蛋白质或肽含有色氨-酸,则通过监测荧光而不是吸光度可以完-全消除该问题。

  3. 变性:HIC促进三级结构的保留,大部分蛋白质被回收,80-100%的生物活性保留。但是,四元结构可能会受到影响;使用的高盐浓度会导致一些含有亚基的蛋白质分解。这种影响通常与列无关,并且必须在每个单独的情况下进行评估。

  4. 聚合:一般来说,这不是一个大问题。倾向于在溶液中聚集的混合物有时会从 HIC 柱中以离散峰形式洗脱。聚集通常涉及疏水相互作用,但似乎色谱柱填料的疏水表面超过了单个蛋白质单体相互结合的趋势。

规格

具有 2µm 颗粒的色谱柱 (孔径选项:-10、-15。其他可用:ASK)



PolyLC PolyPROPYLA色谱柱







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